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冻存袋注意事项

1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态，约为80~90%致密度。

冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有antibody之产生。

2.细胞在液氮中可长期冻存没有时间限制，而不会影响细胞活力﹔在-70度可保存数月。注意冷冻保护剂之品质。

DMSO应为试剂级等级，无菌且无色是直接购买无菌产品，以5~10m1小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。

3.冻存细胞数量要足够。无论再怎么小心，细胞在冷冻和复苏过程中总会死掉一批的。所以，一开始冻存细胞的数量要足够。一般要达到5× 10^6 /毫升，一瓶不够两瓶凑。但是，这个不能一概而论。有些细胞，比如杂交瘤细胞，只需要1-3x 10^6 /毫升

冻存袋，可千万别这么用哈！

1.不要使用金属管夹

2.不要离心

3.不要在冻存袋上直接写字标识冻存细胞的信息

4.不要在冻存袋表面粘帖标签不推荐使用同一冻存袋多次冻融细胞

5.DMSO稀释以后才能放进冻存袋，DMSO浓度不要超过10%

6.复苏细胞时建议把冻存袋放在一个保护袋中进行融化

7.不要超过冻存袋推荐的工作体积

冻存袋简介

属于医院器械领域,涉及一种适合细胞回输用的细胞冻存袋,即生物样品存储袋,包括:一存储袋袋体和与其逐一并排排列的2~6个第二存储袋袋体;一和第二存储袋袋体之间,以及各个第二存储袋袋体之间设置袋体间连接管路;一存储袋袋体上沿设置一输入口并通过该输入口与连接管的一端连接,生物样品经由连接管并通过输入口进入一存储袋袋体;一存储袋袋体上沿设置一取样口,各个第二存储袋袋体上沿设置第二取样口,一取样口和第二取样口用于将存储在袋体内的生物样品取出.本存储袋能够方便地用于对生物样品例如脐带血造血千细胞,血浆等处置,存储,冷冻,复苏以及直接给患者回输生物样品特别是造血细胞.

冻存袋的背景知识

采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或二亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。