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发布时间:2022-02-12 13:22:00 作者:思齐生物
荧光定量PCR八排管哪里有?
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司5261推出的一种新定量试验技4102术,它是通过1653荧光染料或版荧光标记权的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。 原理 PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
八排管具体用法
(1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。
(2)新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
八联排管负压法
1、正确连接负压装置,将96孔DNA制备板放在负压装置上;在PCR,酶消化,酶标记或测序反应溶液中加入3倍缓冲液PCR-A(如果缓冲液PCR-A小于100μl,加入100μl);充分混合并转移至96孔DNA制备板,打开并调节负压至-25-30英寸柱,并缓慢吸出板中的溶液。
2、加入0.3 ml缓冲液W2并吸收溶液。用相同的方法用0.3ml缓冲液W2洗涤两次。确认在试剂瓶上的体积的缓冲液W2浓缩物中加入无水乙醇。
3、维持负压并提取96孔DNA制备板10分钟。
4、在长纤维组织上将96孔DNA制备板粉碎6次,引流管朝下。
5、将96孔DNA制备板置于96孔V形板上,加入25-30ul水或洗脱至膜中心,在室温下静置1分钟。通过以3 000×g离心5分钟洗脱DNA。
八联排管产品特点:
1)100,000个粉尘级清洁车间,无DNA和RNA,无热源,医院用聚pp材料;
2)超薄均匀管壁,导热更快,准确,温度控制准确;
3)光学罩,荧光透过率在95%以上;
4)适用于实时PCR和一般PCR和逆转录实验耗材;
5)适用型号:bio-rad ABI Agilent和普通PCR仪器。不得不说,在生物技术活动中,PCR八联管的作用非常强大,其用途非常广泛,八联管可以在各种生物实验室中看到。
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